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7、血浆如何灭活,灭活不彻底的影响?
血浆需使用恒温自动加热仪彻底灭活,消灭补体的活性,温度设置为56℃灭活30min,静置到室温后1200g离心10min,去掉沉淀后再使用。
如果血浆灭活不彻底,在细胞培养前期,会导致贴壁的细胞增多,转瓶或转袋细胞吹打不下来,造成细胞损失,最终导致培养的细胞数量和流式表型没有达到预期效果,血浆没有彻底灭活还可能导致细胞黏连,使细胞死亡,最终导致细胞培养效果不好。
8、细胞数量分离较少,NK细胞如何诱导培养?
单个核细胞分离数量少,需先保证NK培养的起始密度,外周血起始密度为1.3~1.5*106,脐血起始密度为2.0~2.5*106,再确定起始体系,补液体积按比例相应减少,前期补液时需添加5~10%血浆保证细胞增殖速度。
9、细胞洗涤用DPBS还是生理盐水?
磷酸盐缓冲液是一种平衡盐溶液,主要用途是漂洗、稀释或作为基础溶液配置其他溶液,用途非常广泛,是细胞实验室必不可少的一种试剂。在清洗细胞时,有时会使用生理盐水,但其并不具备缓冲能力,而磷酸盐缓冲液除了NaCl外,还有Na2HPO4和KH2PO4成分,可以在温度、气体组成变化时缓冲,且pH值范围很广,以此保证正常的PH和渗透压,对细胞膜和离子通道有更好的保护作用,因此,生理盐水并不能代替磷酸盐缓冲液使用。
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