细胞培养,一个看似简单的实验,却让众多实验室的小伙伴们变成了人间小苦瓜,摇旗呐喊“细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋”。细胞是极其脆弱的,养细胞就如同养孩子,时时刻刻都要小心呵护着。要想养好细胞,除了要注意选择合适的培养基、避免污染等因素外,还要注意一些容易被忽视的环节。
磷酸盐缓冲液是一种平衡盐溶液,主要用途是漂洗、稀释或作为基础溶液配置其他溶液,用途非常广泛,是细胞实验室必不可少的一种试剂。在清洗细胞时,有时会使用生理盐水,但其并不具备缓冲能力,而磷酸盐缓冲液除了NaCl外,还有Na2HPO4和KH2PO4成分,可以在温度、气体组成变化时缓冲,且pH值范围很广,以此保证正常的PH和渗透压,对细胞膜和离子通道有更好的保护作用,因此,生理盐水并不能代替磷酸盐缓冲液使用。PBS和DPBS作为最常见的两种磷酸盐缓冲液,我们的细胞实验应该选择哪种?
PBS
PBS,即磷酸盐缓冲液,能够提供相对稳定的离子环境和 pH 缓冲能力,一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆等。
DPBS
DPBS,即杜氏磷酸盐缓冲液,是用于短期维持细胞活性的一种平衡盐溶液。在有限时间内维持离体细胞结构和生理学上的完整性。pH 为 7.2-7.4,与人体血液等渗。不含 Ca2+、Mg2+。适用于各种细胞培养应用,例如解离前清洗细胞、运输细胞或组织、稀释细胞进行计数和制备试剂。
DPBS是细胞清洗、标本稀释的首选。与常规的PBS相比,DPBS中不含有Ca2+和Mg2+。Ca2+、Mg2+作为细胞膜的重要组成成分,参与细胞粘附等功能,使用不含 Ca2+、Mg2+的DPBS可避免细胞结团,维持细胞渗透压平衡,保持PH稳定,供细胞和组织一个相对稳定的离子环境;在细胞消化过程,如使用PBS进行清洗细胞,Ca2+的残留也会影响胰酶活性,致使细胞难以消化。所以细胞培养中DPBS的品质也很重要。