您在培养免疫细胞时，是否会遇到这些问题：细胞增殖倍数达不到理想值、纯度表达欠佳、杀伤活性低、微生物污染……排除各种因素后，仍然找不到潜在的原因？这时候我们可以把注意力放到最开始——血液的采集。

采血作为培养免疫细胞的第一步，是获取单个核细胞的主要来源，因此采血的样本质量显得至关重要。但由于采血的步骤和方法相对简单，许多细节往往更容易被大家所忽略。采血管作为装载血液样本的重要容器，其血液抗凝能力、无菌程度以及采血容量等，都与细胞的培养结果密不可分。理想的细胞培养结果，需要从“源”把控。

·肝素钠抗凝剂，细胞培养的无上优解

市面上的采血管形形色色，我们应该如何选择？首先我们需要选择使用哪种抗凝剂，不同的抗凝剂其抗凝原理略有不同。乙二胺四乙酸（EDTA）、枸橼酸盐的抗凝原理基本相同：与血液中钙离子结合成螯合物，使钙离子失去活性，中断凝血过程，从而达到抗凝的目的；肝素钠则是通过加强抗凝血酶Ⅲ，灭活丝氨酸蛋白酶，阻止凝血酶的形成来达到抗凝的目的。

研究表明，使用EDTA抗凝剂，细胞无增殖现象，且随着培养天数增加，细胞逐渐减少。EDTA会发生离子螯合和金属离子螯合，这一过程会抑制细胞的增殖和有丝分裂，EDTA的螯合作用也会影响许多细胞过程，包括能量代谢、细胞调亡、DNA和 RNA合成等。因此，EDTA抗凝剂对细胞增殖有抑制作用，不可用于细胞培养。

·γ射线辐照，微生物的冷酷杀手

由于采集的血液用于细胞培养的特殊性，采血全程及使用的耗材必须无菌，尤其是真空采血管，必须保证真空采血管内的无菌状态，不含内毒素，否则产生微生物污染，细胞培养功亏一篑！

真空采血管灭菌有两种方式，一种是环氧乙烷气体灭菌，另一种是γ射线辐照灭菌。环氧乙烷灭菌存在环氧乙烷残留，解析时间长，且无法对密闭真空采血管内腔灭菌的缺点。辐照灭菌放射出γ射线，产生的高能光子威力大、穿透力强，能穿透塑料等物质，到达微生物体内，将微生物体内的分子（如DNA）破坏，从而彻底杀死细菌、真菌等微生物，辐照灭菌已经成为国际公认的真空采血管灭菌的最佳方式。

·大容量规格，减轻供血者负担

对于免疫细胞过继性治疗，一般采血量会在50ml左右，采用10ml大容量规格的真空采血管，可减少使用的采血管支数，大大降低了供血者的心理负担。另外，大规格真空采血管相较于小规格采血管，真空度更高，具有更快的采血速度，避免因采血时间过长导致采血针凝血堵塞造成的采血量不足，影响后续细胞培养的数量。

·真空不外泄，确保精确采血量

选用具有IIR级别橡胶的真空采血管，气密性好，具有良好的负压能力，不泄压，保障预设真空度，取血样精准，每管采血量达到预设的血样与抗凝剂的比例，不会造成抗凝剂过剩影响细胞培养的情况。

·采血小技巧

1、每次采血避免多次插拔，管塞穿刺针不可触碰到其他地方。

2、每支真空采血管完成采血后，应立即轻摇混匀。

3、建议采集外周血30-50ml，以留取足量的自体血浆用于后续试验。

4、采集的血液最佳处理时间为2个小时，最长不超过4个小时，采血时间过长对分离PBMC的得率及后续细胞的诱导培养均有影响。

5、采集的血液样本需检测传染病四项的病原体：HBV、HCV、HIV、TP，以保障实验人员职业安全。

6、对于脂血样本，应弃掉血浆，可使用血浆替代物替代细胞培养中所使用的血浆，血浆替代物添加量相对血浆量减半，使用5%的添加量即可。

7、应避免使用菌血症、败血症的血液样本进行细胞培养，以免发生微生物污染。

8、脐带血的采集：采血袋抗凝剂建议首选肝素钠，也可使用血液保存液III，如使用100ml容量的采血袋，脐带血采血量应≥80ml，避免因抗凝剂过剩抑制细胞增殖。

9、在分离脐血CBMC时，样本中红细胞和幼红细胞密度不一，可使用样本密度分离液（货号：CS006）以减少残留的红细胞。

10、使用恒温自动加热仪BC-18进行血浆灭活，避免实验室污染。

·选好真空采血管，从“源”把控，走好免疫细胞培养的第一步